TGF-β中和抗體藥效學評價

TGF-β(transforming growth factors-β, 轉化生長因子 TGF-β)是一種多向性、多效性的細胞因子,通過開啟細胞表面的受體信號級聯轉導途徑調節細胞的增殖、分化、遷移和凋亡,對胞外基質的合成、創傷的修復、免疫系統的功能等有重要的調節作用。


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圖示說明:TGF-β在抑制腫瘤適應性免疫中扮演重要角色(圖片.png刺激;Direct Inhibitory Modification抑制)

TGF-β的信號傳導通路有兩種: TGF-β-Smad信號通路和Non-Smad信號通路。其中Smad信號通路是TGF-β產生生物效應的主要途徑。TGF-β在細胞表面與II型受體(TGF-βR II) 和I型受體(TGF-βR I,又稱ALK5) 形成一個雙二聚體受體復合物,細胞膜表面III型受體(TGF-βRIII) 也參與了這個過程,起到一定的輔助作用。II型受體磷酸化并激活I型受體,接著I型受體磷酸化其連接的Smad蛋白分子(Smad2/3) 并釋放到胞漿中,與Smad4蛋白形成復合體轉移到細胞核內,結合不同的轉錄因子和轉錄共激活劑或轉錄共抑制劑,來調節TGF-β靶基因的轉錄,產生生物效應 。TGF-β其他的信號通路包括絲裂原活化蛋白激酶通路、細胞外信號調節激酶(ERK) 通路、JNK、P38、PI3K激酶、PP2A磷酸酶和Rho家族成員等。

有研究表明,在腫瘤微環境下一定濃度的TGF-β 細胞因子會促進腫瘤生長以及轉移的發生。因此,選擇性抑制腫瘤細胞周圍的表達上調的TGF-β,逐漸成為治療非小細胞肺癌、膀胱癌等疾病的熱門治療策略。

我們以熒光素酶報告基因檢測系統為平臺,采用貼壁的穩定轉染的293T-TGF-β-Luc功能檢測細胞系,可以提供TGF-β抗體阻斷或中和活性檢測等服務,為TGF-β靶點的臨床前研究提供解決方案。


293T-TGF-β-Luc激活實驗原理

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圖示說明:采用慢病毒將TGF-β受體基因、SMAD基因,PAI-1啟動子和Luciferase基因,整合到293T細胞中。當TGF-β蛋白與293T細胞膜上的TGF-β受體結合后,引起TGF-β受體胞內信號發生活化,從而進一步引起胞漿內SMAD蛋白形成磷酸化復合物,而后該復合物在細胞核內與PAI-1啟動子結合,啟動Luciferase基因表達,最終導致Luciferase表達水平上升。Figure1、Figure2、Figure3分別為用不同濃度的TGF-β1,TGF-β2,TGF-β3蛋白,處理18h后,Luciferase表達水平檢測結果。


293T-TGF-β-Luc功能阻斷實驗原理


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圖示說明:TGF-β蛋白與293T細胞膜上的TGF-β受體結合后,引起TGF-β受體胞內信號發生活化,從而進一步引起胞漿內SMAD蛋白形成磷酸化復合物,而后該復合物轉移到細胞核內,結合到PAI-1啟動子上,啟動Luciferase基因表達,Luciferase表達水平上升。在該檢測系統中,加入具有阻斷功能的anti-TGF-β或anti-TGF-βR(TGF-β受體)抗體后,導致TGF-β蛋白不能與TGF-β受體結合,該激活信號通路被阻斷,Luciferase表達水平降低。Figure1為用不同濃度的anti-TGF-β1,處理18h后,Luciferase表達水平檢測結果。


  • 準備293T-TGF-β-Luc

  • 293T-TGF-β-Luc抗體功能阻斷實驗

  • 周期1-2周




  • 抗體

  • 項目報告

0086-512-62570431

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