ADCC活性檢測

抗體作為免疫系統的組成部分,在抵御疾病中發揮重要的作用??贵w依賴細胞介導的細胞毒作用(antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity,ADCC),是抗體發揮作用的方式之一,當IgG抗體通過Fab段與靶細胞(病毒感染的細胞及腫瘤細胞)表面抗原決定簇特異性結合后,其Fc段可與有FcγR的殺傷細胞(NK細胞、單核-巨噬細胞、中性粒細胞)等效應細胞結合,觸發效應細胞的殺傷活性,直接殺傷靶細胞(病毒感染的細胞及腫瘤細胞)。


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ADCC作用是抗體藥物殺傷靶細胞的理想機制,通過ADCC試驗可驗證單克隆抗體的抗腫瘤活性。早期ADCC驗證方法多為基于新鮮制備的外周血單核細胞或NK細胞做為效應細胞的殺傷試驗,但這些方法存在細胞分類和培養困難、操作繁瑣、背景值高、且受個體差異影響等缺陷。

愛康得生物致力于腫瘤抗體藥物的研發,為解決傳統ADCC試驗中常見的問題,我們以熒光素酶報告基因檢測系統為平臺,構建了穩定轉染CD16受體和NFAT(Nuclear Factor of Activated T-cells)反應原件的Jurkat-NFAT-Luc-CD16細胞系。當抗體的Fab段與靶細胞上抗原結合以后,抗體的Fc段與效應細胞Jurkat-NFAT-Luciferase-CD16細胞表面的(FcγRIIIA)結合,引起Jurkat-NFAT-Luciferase(New)-CD16細胞內NFAT相關信號通路活化,進而導致熒光素酶表達水平上升。該系統具有以下優勢:

  • 數據結果穩定,檢測過程快速;

  • 更高的靈敏度和優良的可重復性;

  • 可應用于懸浮或貼壁的各種靶細胞;

  • 可以用于質控治療性抗體藥物的效力和穩定性。


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圖示說明:當抗體的Fab段與靶細胞上抗原結合以后,抗體的Fc段與效應細胞Jurkat-NFAT-Luciferase(New)-CD16細胞膜表面CD16(FcγRIIIA)結合,引起CD16(FcγRIIIA)胞內信號域發生活化,激活Syk蛋白,Syk蛋白的活化導致內質網內Ca+外流,從而使得細胞質內Ca2+濃度上升,Ca2+與Calmodulin(鈣調蛋白)結合以后,可進一步向下游傳遞信號,使得處于抑制狀態的磷酸化NFAT去磷酸化,解除抑制狀態,NFAT轉移至細胞核內,導致NAFT相關的啟動子基因活化,啟動Luciferase基因表達。通過檢測不同抗體濃度下,Luciferase表達水平,可以評估相關抗體的ADCC活性。ADCC效應的強弱,與抗體抗原親和力強弱,抗體的Fc段類型及抗體濃度等,密切相關。


案例展示: 

Transform of CD276 mAb.jpg


  • 準備靶細胞并與待測抗體孵育

  • 準備效應細胞

  • ADCC活性檢測

  • 周期1-2周


  • 抗體基本信息

  • 靶細胞


  • 項目報告


0086-512-62570431

[email protected]

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