單域抗體(納米抗體)定制服務

什么是納米抗體?

納米抗體最早是由比利時科學家 Hamers 等1993 年在《Nature》首次報道。在羊駝外周血中存在一種天然缺失輕鏈的抗體,該抗體只包含一個重鏈可變區(VHH)和兩個常規的CH2與CH3區,該抗體是已知的可結合目標抗原的最小單位。VHH晶體為2.5nm,長4nm,分子量只有15KD,因此也被稱作納米抗體(Nanobody或single domain antibody)。與普通的Y型抗體相比,納米抗體結構簡單,易于進行抗體工程改造,其分子量小,組織穿透力強,穩定性高,在疾病的診斷及治療方面有廣闊的應用前景。

納米抗體與普通抗體的結構和功能比較

納米抗體重鏈的同型二聚體缺少輕鏈及重鏈第一個恒定區CH1,重鏈可變區與CH2-CH3段通過鉸鏈區鏈接。與普通Y型抗體的重鏈相比,納米抗體序列FR2存在五個保守位點氨基酸差異:Leu12→Ser、Val/Phe42→Tyr、Gly49→Glu、Leu/Arg50→Cys、Trp52→Gly。在傳統抗體的重鏈FR2中42,49,50,52這四個位點主要參與VL 作用,多為疏水的氨基酸,但在VHH中變成了親水氨基酸,這種氨基酸性質的改變提高了納米抗體的水溶性,減少了抗體的聚合性,也直接導致了VHH不能夠結合輕鏈。

此外,納米抗體的CDR3區更長,通常由16~24個氨基酸組成,甚至有些單域抗體的CDR3超過25個氨基酸,相對于傳統單抗,其CDR3僅有7~12個氨基酸。這種長CDR3結構形成的凸環有利于單鏈抗體結合抗原分子的隱蔽抗原表位,這也是提高單鏈抗體與抗原結合能力的主要原因,同時導致其結構非常穩定,能夠耐受高溫及苛刻的極端環境。納米抗體易于進行蛋白工程操作,可以改造成單價、雙價、雙特異及多價抗體,同時也能形成融合蛋白進行靶向治療。

納米抗體的優勢與應用

納米抗體在諸多方面均優于傳統抗體。傳統抗體的開發周期長,穩定性較低,保存條件苛刻;而納米抗體分子量小,親和力高,可穿透血腦屏障,生產制備簡便,可用傳統的大腸桿菌表達體系進行制備,也可以使用酵母或哺乳動物細胞生產,與人抗體重鏈氨基酸序列高度相似,易于進行人源化,親和力高,逐漸成為新一代治療性生物醫藥與臨床診斷試劑中的新興力量。

納米抗體獲得

雜交瘤技術在鼠抗開發領域得到廣泛應用,但對于缺少骨髓瘤細胞的物種而言,該技術手段并不適用于納米抗體的開發。目前廣泛應用的噬菌體展示技術是獲得納米抗體序列的另一重要技術路徑。但是不可否認的是部分抗體無法正確的與噬菌體衣殼蛋白融合并展示出來,且噬菌體自身與靶蛋白的非特異性結合也是限制抗體篩選成功率的不利因素之一?;诖?,我們開發了基于Single B細胞克隆的納米抗體篩選平臺

這種方法保留了輕重鏈可變區的天然配對,具有基因多樣性好、效率高、適用于任意動物抗體篩選的特點。由于篩選的過程中,可一次性覆蓋全部靶向抗原特異性的B細胞,因此獲得的抗體更具有多樣性,同時不會出現抗體基因丟失現象;并可避免使用噬菌體庫篩單克隆抗體過程中的假陽性,或非特異性結合等問題,可大大加速納米抗體篩選的速度,適用于大規模的單克隆抗體藥物篩選。


技術流程

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為什么選擇ABexpresTM

這種方法保留了輕重鏈可變區的天然配對,具有基因多樣性好、效率高、適用于任意動物抗體篩選的特點。由于篩選的過程中,可一次性覆蓋全部靶向抗原特異性的B細胞,因此獲得的抗體更具有多樣性,同時不會出現抗體基因丟失現象;并可避免使用噬菌體庫篩單克隆抗體過程中的假陽性,或非特異性結合等問題,可大大加速納米抗體篩選的速度,適用于大規模的單克隆抗體藥物篩選。

案例展示:




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圖示說明:基于ABexpressTM篩選的納米抗體可有效的與靶細胞結合

  • PBMC處理

  • 抗體展示庫制備

  • 抗體篩選和親和力測定

  • 抗體功能鑒定

  • 20-26周交付

  • 目的基因信息

  • 重組蛋白

  • 重組抗體

  • 實驗報告

0086-512-62570431

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