ABexpressTM-------基于單個B細胞測序的抗體發現平臺

什么是ABexpressTM平臺

單克隆抗體在現代生物學、醫學及制藥領域扮演了重要的角色,目前單克隆抗體制備技術有雜交瘤技術、噬菌體展示技術等。

然而各種抗體發現形式均存在一定的局限性,例如鼠雜交瘤單克隆抗體技術的基本過程是將來源于免疫接種過的小鼠的B 細胞與骨髓瘤細胞融合,繼而篩選出既能無限增殖又能分泌抗體的鼠雜交融合細胞,但是存在細胞融合成功率低、染色體丟失等不利因素。通過噬菌體展示技術,雖然可以擺脫 B 細胞融合過程、但是得到抗體可能發生構象改變繼而丟失對抗原的親和性,并且由于抗體重鏈和輕鏈隨機組合,無法保持抗體重鏈輕鏈的天然配對。

 為快速高效的獲得多樣性的天然抗體,愛康得開發了ABexpressTM平臺,這是一種基于流式分選、體外克隆和表達抗原特異性B細胞抗體基因的技術——通過不同的流式抗體和靶標抗原組合,分選出對靶標抗原具有親合力的單個B細胞;通過PCR技術,克隆單個B細胞抗體編碼基因并構建編表達載體,轉染工具細胞株后,可驗證細胞培養上清液中是否存在對靶標抗原具有親和力的抗體。這種方法可避免雜交瘤和噬菌體技術帶來的諸多不便,獲得的抗體保留了輕重鏈可變區的天然配對,具有基因多樣性好、效率高、周期短、適用于任意動物抗體篩選的特點。目前,我們已經利用這個平臺,用于包括鼠單抗、兔單抗、全人源單抗和納米抗體在內的多種抗體篩選。

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圖示說明:基于ABexpressTM平臺篩選抗體流程,本平臺可省略細胞融合或噬菌體建庫等技術流程

為什么選擇ABexpressTM平臺

這種方法保留了輕重鏈可變區的天然配對,具有基因多樣性好、效率高、適用于任意動物抗體篩選的特點??杀苊馐褂檬删w庫篩單克隆抗體過程中的假陽性,或非特異性結合等問題,可大大加速單克隆抗體篩選的速度,適用于大規模的單克隆抗體藥物篩選。

ABexpressTM

雜交瘤技術

噬菌體技術

  • 覆蓋免疫動物產生的所有靶標特異性抗體分泌細胞

  • 最短六周,一步獲得準確的抗體基因編碼序列

  • 平臺可擴展至任意動物的單克隆抗體或納米抗體

  • 高通量,一次可以獲取到100+不同的候選抗體

 

  • 雜交瘤融合效率低,很多B細胞不能形成穩定融合株

  • 大量細胞培養,制備成本極高

  • 因為骨髓瘤細胞的限制,當前只能制備鼠單克隆抗體

  • 工作人員培訓時間長,工作量大,通量低

  • 單抗制備流程長(8-10個月)

  • 雜交瘤細胞不穩定,容易導致抗體基因丟失

 

  • 噬菌體構建過程中,無法保證噬菌體庫覆蓋所有序列

  • 抗體展示過程中可能出現錯誤結構,抗體無法與靶抗原結合

  • 噬菌體與靶標的非特異性結合無法避免

  • 淘選工作量龐大,獲得候選抗體數量少


 

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